La sintonía que ha acompañado la cabecera del Un, dos, tres...Responda otra vez en las mayoría de las etapas, concretamente en la 2ª, la mitad de la 3ª, y de la 7ª a 10ª fue compuesta por el argentino Adolfo Waitzman. La letra es del propio Ibáñez Serrador, que al mismo tiempo prestaba su voz a la calabaza Ruperta en la interpretación del tema. El concepto creado por el realizador es un programa que fusiona:
* La cultura, representada en la primera parte del programa, la ronda de preguntas.
* Las actividades físicas, presente en la segunda parte del programa, la eliminatoria.
* La suerte, decisiva en la tercera parte del programa, la subasta.
Muchos de los números musicales estaban interpretados por la azafatas del programa y relacionados con el tema de la edición del día.
Las cabeceras de todas las etapas se caracterizan por poseer una melodía pegadiza y muy animada. La sintonía fue evolucionando a medida que nuestro país avanzaba históricamente, pero la esencia era la misma.
En la primera etapa unas voces femeninas interpretaron dos sintonías, "Un dos tres... responda otra vez" en los primeros programas y "No sea usted Cicuta" en el resto de la etapa.
También merece una mención Chicho Ibañez y su voz en off, presente en muchos momentos del programa.
